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產(chǎn)品時(shí)間：2024-05-17
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乙酰賴氨酸工具
概述
翻譯后乙酰化發(fā)生在賴氨酸殘基的ε-氨基上，作為一種可逆且高度動態(tài)的PTM，已知其是多種細(xì)胞事件的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，包括染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄、代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)。
主要功能
首乙酰賴氨酸研究者的優(yōu)化試劑盒
分析細(xì)胞或組織樣品中內(nèi)源性或轉(zhuǎn)染蛋白的乙酰化
最完整的乙酰化蛋白質(zhì)圖譜
化學(xué)計(jì)量分析帶來更深入的機(jī)理見解
查看備受關(guān)注的Signal™Seeker工具箱的新增內(nèi)容（如下）
新格式-信號導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒（目錄號BK163-S.15測定）
新格式-信號導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒（目錄號BK163，30個(gè)測定）
新-信號導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒-AAC03（目錄號BK164，30個(gè)測定）
新格式-乙酰賴氨酸親和珠（AAC04
乙酰賴氨酸抗體小鼠單克隆抗體
乙酰賴氨酸小鼠單克隆抗體
抗乙酰賴氨酸抗體是一種泛乙酰賴氨酸酯小鼠單克隆抗體，是Signal Seeker™產(chǎn)品線的一部分。抗乙酰賴氨酸抗體識別通過賴氨酸殘基的ε-胺基團(tuán)上的乙酰化進(jìn)行翻譯后修飾的蛋白質(zhì)，所述賴氨酸殘余基出現(xiàn)在所有蛋白質(zhì)的30-50%上，特別是組蛋白、p53、微管蛋白和肌球蛋白。使用乙酰化蛋白的專有混合物來產(chǎn)生高度強(qiáng)健的抗體，該抗體已被證明在IP、WB、ChIP和IF應(yīng)用中識別廣泛的乙酰化蛋白。這種抗乙酰賴氨酸抗體與其他市售抗體相比具有許多優(yōu)點(diǎn)，如下所示。
已驗(yàn)證的應(yīng)用程序
使用乙酰賴氨酸抗體的蛋白質(zhì)印跡
細(xì)胞骨架的抗乙酰賴氨酸抗體類別#AAC01識別0.005ng化學(xué)乙酰化的BSA，并且在靈敏度上與其他市售抗體相當(dāng)。與其他抗乙酰賴氨酸抗體不同，該抗體與非乙酰化BSA沒有顯示出交叉反應(yīng)性。要查看完整的蛋白質(zhì)印跡比較，請參閱優(yōu)化方案或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。
乙酰賴氨酸蛋白質(zhì)印跡
使用乙酰賴氨酸抗體的免疫沉淀
將AAC01對IP組蛋白的能力與其他市售抗體進(jìn)行比較。Cytoskeley的抗乙酰賴氨酸抗體為IP應(yīng)用提供了明顯的優(yōu)勢。每個(gè)試管足以進(jìn)行大約20次IP測定。要查看完整的免疫沉淀比較，請參閱優(yōu)化方案或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。
乙酰賴氨酸免疫沉淀
使用乙酰賴氨酸抗體的免疫熒光
將未經(jīng)處理（頂部）或用TSA（5mM，12小時(shí)）處理（底部）的人表皮樣癌A431細(xì)胞按本方法所述染色。乙酰化的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白在綠色熒光中可見。注意，與未處理的對照相比，TSA處理的樣品中乙酰化微管網(wǎng)絡(luò)清晰可見。熒光核強(qiáng)度表明核中乙酰化蛋白的豐度很高。要查看完整的免疫熒光方案，請參閱優(yōu)化方案或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。
乙酰賴氨酸IF
使用乙酰賴氨酸抗體的ChIP
染色質(zhì)由未處理或TSA處理（5mM，4小時(shí)）的A431細(xì)胞制備。簡言之，用1%甲醛固定細(xì)胞10分鐘，并通過使用抗乙酰基抗體（1:100稀釋）免疫沉淀酶切染色單體。通過引物對擴(kuò)增管家基因GAPDH的啟動子區(qū)，并通過2%瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產(chǎn)物。要查看推薦的ChIP協(xié)議，請參閱優(yōu)化協(xié)議或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。
蛋白質(zhì)乙酰化背景
蛋白質(zhì)的乙酰化可以作為共翻譯或翻譯后修飾（PTM）發(fā)生（1）。共翻譯乙酰化發(fā)生在大約85%的哺乳動物蛋白質(zhì)的N-末端，它是不可逆的，被認(rèn)為在蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、定位和合成中很重要（1）。翻譯后乙酰化發(fā)生在賴氨酸殘基的ε氨基上，作為一種可逆且高度動態(tài)的PTM，已知其是多種細(xì)胞事件的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，包括染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄、代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)（2-3）。迄今為止，已有4000多種蛋白質(zhì)被鑒定為PTM乙酰化的靶標(biāo)，這與細(xì)胞前體中的磷酸化相當(dāng)（3）。抗體AAC01檢測乙酰賴氨酸PTMs。
乙酰賴氨酸親和珠-AAC03
乙酰賴氨酸親和珠
Cytoskeley提供兩種類型的乙酰賴氨酸親和珠，Cat#AAC02珠和Cat#AAC03珠。這兩種試劑都由與G蛋白珠共價(jià)連接的小鼠抗乙酰賴氨酸抗體組成，并且都富集了廣泛的乙酰化蛋白。AAC02珠粒和AAC03珠粒可以組合以提供更廣泛的乙酰化蛋白質(zhì)富集譜（Cat#AAC04珠粒是AAC02珠與AAC03珠的1:1組合）。
與AAC02珠相比，AAC03珠具有重疊但獨(dú)的特異性，在檢查特定靶蛋白時(shí)可能優(yōu)于AAC02珠，請參閱詳細(xì)方法和驗(yàn)證應(yīng)用程序以獲取示例。由于乙酰化通常只占總靶蛋白的很小百分比，因此使用優(yōu)化的試劑對成功至關(guān)重要。當(dāng)檢查新的感興趣蛋白質(zhì)（POI）的乙酰化狀態(tài)時(shí)，建議分別嘗試AAC03珠和AAC02珠，以確定哪種試劑適合y
已驗(yàn)證的應(yīng)用程序
應(yīng)用1：檢測目標(biāo)POI中的乙酰化變化
AAC03珠已被證明是乙酰化EGFR和RhoGDI靶標(biāo)POI免疫沉淀的優(yōu)良試劑（圖1）。在HDAC抑制劑存在的情況下，AAC03珠-IP顯示EGFR和RhoGDI的乙酰化分別增強(qiáng)11.3倍和2.5倍。而AAC02 Bead分別表現(xiàn)出較弱的8倍和1.1倍的增長。
圖1圖例：AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠漿）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細(xì)胞的乙酰化蛋白IP 6小時(shí)。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析，并使用LiCor-Empiria軟件對信號進(jìn)行定量。還進(jìn)行IP測定，并對小鼠IgG對照珠的信號進(jìn)行定量（印跡未顯示）。每個(gè)IP使用1 mg裂解物。
應(yīng)用2：總乙酰賴氨酸圖譜的免疫沉淀
AAC03珠顯示出強(qiáng)大的總乙酰基IP圖譜，與AAC02珠具有重疊但特異性圖譜。AAC03珠可以單獨(dú)使用，也可以與AAC02珠組合使用來研究乙酰基組。
圖2圖例：使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠漿）對用脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細(xì)胞的乙酰化蛋白進(jìn)行IP處理6小時(shí)。用AAC03-HRP抗體（1:3000）洗脫并通過蛋白質(zhì)印跡分析富集的乙酰化蛋白的總圖譜。使用小鼠IgG珠作為非特異性結(jié)合的對照（Cat#CIG02）。每次IP測定使用1 mg Cos-7裂解物
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